iFOLD蛋白重折叠三兄弟[新品推荐]

默克旗下Novagen开创性地推出了iFOLD 蛋白重折叠系统。这三兄弟各带有一块96孔板，上面分别有92、94和91种独特的缓冲液。这些缓冲液成分是根据REFOLD数据库和众多成功重折叠的文献而确定的，内含特定pH值、盐、环式糊精、氧化还原试剂以及重折叠添加剂的不同组合。该系统也是2009年度生命科学十大创新产品评选活动的候选产品之一。

俗话说，巧妇难为无米之炊，蛋白质的结构与功能研究当然也离不开大量的高纯蛋白。要想获得大量蛋白，娇贵的哺乳动物细胞可很难做到，主要依靠大肠杆菌表达系统，操作简单，价格便宜量又足。然而，大肠杆菌中生产的外源蛋白量是不少，却常常形成包涵体，让人欢喜让人忧。虽说包涵体也有不少优点，诸如易纯化、耐蛋白水解等，但要想摸索出合适的条件，让包涵体重折叠成天然的构象，自然少不了一番周折。如果能同时筛选多个重折叠条件，那将会节省不少时间，且增加成功的几率，起到事半功倍的效果。

默克旗下Novagen就开创性地推出了这样的系统——iFOLD 蛋白重折叠三兄弟。这三兄弟各带有一块96孔板，上面分别有92（老大）、94（老二）和91（老三）种独特的缓冲液。这些缓冲液成分是根据REFOLD数据库（http://refold.med.monash.edu.au）和众多成功重折叠的文献而确定的，内含特定pH值、盐、环式糊精、氧化还原试剂以及重折叠添加剂的不同组合。

iFOLD三兄弟中的老幺是在去年底上市的，它的独特之处是采用全新的化学试剂—FoldACE—作为主要的复性添加剂。这个FoldACE试剂是什么来头？有什么好处呢？它是从一个能增加蛋白回收率的化学试剂库中筛选出来的。FoldACE试剂共有五种，每一种都是水溶性的有机盐，分子量小于500 Da。它们不是去污剂，也不会形成胶束。在蛋白复性之后，FoldACE试剂可以通过金属螯合亲和层析或分子筛的方法有效去除，透析或超滤也可以。实验表明，它们能显著增强某些蛋白的折叠效率。

除了FoldACE试剂，iFOLD 3系统复性缓冲液的pH缓冲液成分也是五选一，分别是Bis-Tris、MOPS、HEPES、EPPS和TAPS。孔中还包含了还原剂（TCEP）或谷胱甘肽氧化还原缓冲液。iFOLD 3能根据不同的缓冲液、pH值、氧化还原剂和FoldACE试剂的组合，筛选一个蛋白的91种复性条件（91个实验孔和5个对照孔）。

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筛选流程如下：
起始物质：包含目标蛋白的细胞 → 收集细胞 → 超声裂解细胞，并加入Lysonase生物处理试剂 → 离心收集包涵体 → 用Triton X-100洗涤包涵体 → 用盐酸胍变性包涵体 → 用iFOLD 3平板快速复性目标蛋白 → 用D-Tube96 透析器透析缓冲液 → 分析复性蛋白

iFOLD 蛋白重折叠三兄弟的比较：

	iFOLD 系统1	iFOLD 系统2	iFOLD 系统3
包涵体洗涤剂	1.0% Triton-X-100	0.125 M NDSB-201 (或Triton X-100)	1.0% Triton-X-100（或NDSB-201）
包涵体变性剂	4.4% N-lauroylsarcosine	7.0 M GuHCl（或8.0 M 尿素）	7.0 M GuHCl
包涵体还原剂	5 mM TCEP	10 mM TCEP	1.0 mM TCEP 1 5.0 mM TCEP 2 6.0 mM + 4.0 mM GSH + GSSG 1 8.0 mM + 2.0 mM GSH + GSSG 2 9.5 mM + 0.5 mM GSH + GSSG 3
变性的目标蛋白浓度	1 mg/ml	5 mg/ml	10 mg/ml
每孔中的总蛋白	50 ug	50 ug	100 ug
缓冲液体积（50 mM）	Tris-HCl, pH 7.0, 7.5, 8.0或8.5	MOPS, pH 7.0 HEPES, pH 7.5 EPPS, pH 8.0 TAPS, pH 8.5 CHES, pH 9.0	Bis-Tris, pH 6.0 MOPS, pH 7.0 HEPES, pH 7.5 EPPS, pH 8.0 TAPS, pH 8.5
重折叠添加剂	100 mM NaCl 250 mM NaCl 1.0 mM TCEP 3.8 mM GSH + 1.2 mM GSSG 1.0 mM EDTA 1.0 mM CaCl2 + 1.0 mM MgCl2 0.5 M GuHCl 20% glycerol 0.1% PEG6000 0.5 M L-arginine 12.5 mM 环式糊精	24 mM NaCl + 1.0 mM KCl 240 mM NaCl + 10 mM KCl 1.0 mM TCEP 9.0 mM GSH + 1.0 mM GSSG 6.0 mM GSH + 4.0 mM GSSG 1.0 mM EDTA 0.25 mM each of CaCl2, MgCl2, MnCl2 & ZnCl2 0.5 or 1.0 M NDSB-201 0.5 or 1.0 M NDSB-256 1.5 M sorbitol 0.58 M trehalose 0.06% PEG3350 0.5 M L-arginine 10 mM 环式糊精	FoldAce试剂1 FoldAce试剂2 FoldAce试剂3 FoldAce试剂4 FoldAce试剂5

iFOLD系统的特征包括：

• 覆盖近300个重折叠条件
  
• 包括纯化包涵体的所有试剂
  
• 含有96孔板重折叠缓冲液矩阵
  
• 测试pH范围在7.0-9.0之间
  
• 重折叠添加剂包括盐、环式糊精、氧化还原剂、；离液盐、NDSB和独特的FoldACE试剂
  
• 重折叠条件基于众多文献和REFOLD数据库
  

有了iFOLD重折叠三兄弟的帮助，相信枯燥冗长的实验摸索可以很快完成，并让你迅速走上蛋白结构与功能研究的光明大道。（生物通 余亮）

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